Señalización celular asociada a especies reactivas de oxígeno y su rol en cicatrización de heridas / Cellular signaling associated with reactive oxygen species and their role in wound healing

La señalización celular es un complejo mecanismo molecular que consiste en la transferencia de información proveniente de un ambiente externo celular, que es recibida, traducida y convertida en una respuesta interna, permitiendo comunicar a la célula con su entorno y con otras células. A nivel intracelular se generan una cascada de señales que involucra la formación de mensajeros que tienen por objetivo modificar la expresión génica. Sin embargo, existen muchos factores que regulan la actividad de estos mensajeros, entre ellos la formación de especies reactivas de oxigeno (ROS). Se ha observado que la producción de ROS está asociada a muchas patologías y por lo tanto pueden afectar una vía de señalización celular que en condiciones normales está regulada. No obstante, se ha observado en los últimos años que ROS es fisiológicamente necesario para que la célula cumpla mucha de sus funciones y que en el ambiente intracelular está totalmente regulado existiendo un balance entre oxidantes y antioxidantes, pero que el balance se pierde cuando existe una depleción de los sistemas antioxidantes y/o una producción de radicales libres que conlleva a un ambiente oxidante. En la presente revisión narrativa se hizo un análisis de las principales vías de señalización celular que son regulados por ROS y como esto podría estar asociado al proceso de cicatrización de heridas.

Cellular signaling is a complex molecular mechanism that consists of the transference of data from an external cellular environment that is received, translated and converted into an internal response, allowing the cell to communicate with the environment and other cells. At the intra-cellular level, a torrent of signals is generated that involves the formation of messengers which aim to modify the gene expression. However, many factors regulate the activity of these messengers, such as the formation of oxygen reactive species (ROS). It has been noted that the production of ROS is linked to many pathologies and therefore can affect a cellular signaling pathway that in normal conditions would be regulated. However, it has been noted in the past years that ROS is physiologically needed for the cell to fulfill many of its functions and that is normalized in the intra-cellular environment existing a balance between oxidants and antioxidants, but the balance is lost whenever there is a depletion of the anti-oxidant systems and /or production of free radicals leading to an oxidant environment. In the present narrative review, an analysis of the main cellular signaling pathways regulated by ROS was made, and how this could be linked to the wound healing process.

Efecto antiangiogénico del ácido cafeico y pinocembrina en el proceso de angiogénesis fisiológica de fetos de pollo / Anti-angiogenic effect of caffeic acid and pinocembrin in the process of physiological angiogenesis of chicken fetuses

La angiogénesis es el proceso por el cual se forman nuevos vasos sanguíneos a partir de otros ya existentes. Para que esto se lleve a cabo de forma correcta debe existir un balance entre los factores proangiogénicos y los factores antiangiogénicos dentro del microambiente tisular. Por otra parte, la existencia de productos químicos naturales como los polifenoles, que son capaces de adquirirse en la dieta, inducen a estos factores a intervenir en el proceso de angiogénesis. Se administraron los polifenoles en filtros de metilcelulosa sobre la membrana alantocoriónica de huevos White Leghorn, manteniendo el posterior desarrollo normal del feto. Se utilizaron 15 fetos de pollo fijados en formalina tamponada, a los cuales se extrajo el corazón. El procesamiento de las muestras de corazón se realizó a través de técnicas histológicas, histoquímicas e inmunohistoquímica. Finalmente se evaluó la presencia del VEGF y la capacidad de formar vasos sanguíneos bajo el tratamiento con los polifenoles. La inmunorreactividad fue cuantificada mediante Image J®. Los resultados indican que Ácido cafeico y Pinocembrina disminuyen la densidad microvascular y la expresión de VEGF en corazones de fetos de pollo tratados con estos polifenoles. Tanto el Ácido Cafeico como la Pinocembrina cumplen un rol inhibitorio en el proceso de angiogénesis fisiológica en corazón de pollo, pudiendo modular las vías de señalización mediadas por los VEGFR o modulando la disponibilidad de VEGF. Estos polifenoles podrían utilizarse para el estudio de otros tejidos asociados a angiogénesis patológica.

Angiogenesis is the process by which new blood vessels are formed from other existing ones. A balance between proangiogenic factors and anti-angiogenic factors within the microenvironment must exist for the process to be carried out correctly. Similarly, the existence of natural chemicals such as polyphenols, which are capable of being acquired in the diet, induce these factors in the angiogenic process. Polyphenols were administered in the methylcellulose filters on the of chorioallantoic membrane of White Leghorn eggs, maintaining the normal posterior development of the fetus. 15 chicken fetuses were fixed in buffered formalin, obtaining the hearts to histological processing, performing histological, histochemical and immunohistochemical techniques. VEGF levels and the ability of the blood vessels growing under the stimulation of the polyphenols were evaluated. Immunoreactivity was quantified by Image J. The results indicate that caffeic acid and pinocembrin decreased microvascular density and VEGF expression in hearts stimulated with these polyphenols. Both the caffeic and pinocembrin acids play an inhibitory role in the physiological angiogenesis process in the chicken heart, which decrease the microvascular density and could act by modulating the signaling pathways mediated by the VEGFR or by modulating the availability of VEGF. The use of these polyphenols could be useful in studies of other tissues associated with pathological angiogenesis.

Expresión de calreticulina en placenta canina / Calreticulin expression in canine placenta

La placenta es un anexo embrionario de los mamíferos que tiene por función principal el intercambio de nutrientes y gases y proteger al concepto de un potencial daño inmune provocado por diferencias alogénicas en los Complejos Principales de Histocompatibilidad paternos. Se han descrito diversas proteínas asociadas a su función, siendo Calreticulina una de ellas. Si bien existen estudios de la presencia de Calreticulina en placenta humana, no existen reportes de esta proteína en la placenta canina. Se obtuvieron muestras de placenta canina de las que se extrajo el contenido proteico total y se determinó la presencia de Calreticulina por western blot e inmunohistoquímica. Los resultados mostraron presencia de Calreticulina en placenta canina con un peso molecular aparente de 60 kDa, concordante con lo descrito para la molécula por otros autores. El análisis inmunohistoquímico mostró que Calreticulina canina está presente principalmente en el trofoblasto de las vellosidades, no existiendo diferencias en cuanto a su localización al compararla con placenta humana, pese a sus diferencias morfológicas e histológicas. Esta información permitirá establecer un protocolo estandarizado de extracción de Calreticulina desde placenta, así como orientar acerca de los posibles roles de esta molécula en la placenta.

The placenta is an embryonic organ present in mammals, whose main functions are the exchange of nutrients and gases and to protect the fetus from potential immune damage mediated by paternal and maternal allogeneic differences in the Major Histocompatibility Complex. Several proteins associated with its function have been described, being Calreticulin one of them. Although there are studies on the presence of Calreticulin in human placenta, there are no reports of this protein in canine placenta. Samples from canine placenta were obtained, proteins extracted and Calreticulin was subsequently detected by western blot and immunohistochemistry. The results showed the presence of Calreticulin in canine placenta with an apparent molecular weight of 60 kDa, in agreement with the results from other authors. The immunohistochemical analysis showed that canine Calreticulin is present mainly in the trophoblast of the villi, and there is no difference in its localization when compared with a blood-filled placenta such as human one, despite its morphological and histological differences. We also propose a standardized protocol for the extraction of Calreticulin from placenta, given its abundant expression in this organ. Future studies are aimed at elucidating possible roles of this protein in placenta.

Efecto del aliskireno sobre la angiogénesis en modelo de membrana alantocoriónica (MAC) de pollo / Effect of aliskiren on angiogenesis in chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay

La acción antiangiogénica de los inhibidores del receptor de angiotensina II (ARA II), ha sido documentada previamente, sin embargo, no ha sido descrita la relación entre angiogénesis e inhibidores directos de la renina (DRIs), los cuales participan regulando el sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA). El objetivo fue demostrar el efecto antiangiogénico de aliskireno, un DRI, en membranas alantocoriónicas (MAC) de pollo, para lo cual fueron instilados aliskireno y enalapril sobre MAC en distintas concentraciones para realizar su comparación posterior. En secciones histológicas seriadas se registró el número de vasos sanguíneos presentes en 9000 µm2 bajo microscopio de luz a máximo aumento, y se realizó análisis estadístico utilizando ANOVA y el test de Tukey para demostrar posibles diferencias. Los receptores tratados con aliskireno, en ambas concentraciones utilizadas, presentaron menor densidad vascular, en comparación con los controles, siendo ésta estadísticamente significativa a mayor concentración. Aliskireno en concentraciones altas tiene un efecto antiangiogénico en un modelo experimental de MAC. Este hallazgo plantea la necesidad de estudios posteriores, dada la proyección que podría tener el uso inhibidores directos de la renina. A partir de estos resultados, se podría pensar en la factibilidad del uso de aliskireno para la modulación de la angiogénesis en diversas enfermedades crónicas no transmisibles.

Angiogenesis is the formation of new blood vessels from pre-existing ones. Antiangiogenic effect of angiotensin receptor blockers has been reported, however, the relationship between direct renin inhibitors and angiogenesis has not been well described. To assess the antiangiogenic effect of aliskiren, a direct renin inhibitor, on chick embryo chorioallantoic membrane (CAM) assay. Aliskiren and enalapril were instilled in different concentrations and compared. In serial histological sections, the number of blood vessels per 9000 µm2 area under observation through optical microscope using maximum zoom, was registered. Statistical analysis using Anova and Tukey test in order to show possible differences, was performed. Receptors treated with aliskiren presented lower vascular density, which was statistically significant when a higher concentration was administered. High concentrations of aliskiren have an antiangiogenic effect on CAM assay. This finding means further studies are needed, because of the usefulness direct renin inhibitors could have. These results, also, might enhance the possibility of using aliskiren for regulating angiogenesis in the context of non-transmissible chronic diseases.

Efecto de celecoxib en una variante multirresistente del tumor TA3: una descripción histológica / Celecoxib effect in a multiresistant variant of the TA3 tumor: a histologic

En el estudio del cáncer, se utilizan diversas líneas celulares, cada una de ellas con características propias. Una de esas líneas tumorales es la variante multirresistente a drogas del tumor TA3. Si bien, existen diversos estudios con esta línea tumoral, no existe una descripción morfológica detallada de esta, ni tampoco que se observe el efecto del Celecoxib, un inhibidor de COX-2 sobre este tejido. Se usaron 18 ratones divididos en 3 grupos, los cuales recibieron: Inoculación de PBS; inoculación de células tumorales TA3; inoculación de células tumorales + tratamiento con Celecoxib (1000 ppm), respectivamente. Los ratones fueron sacrificados y procesados histológicamente para ser teñidos con H&E, PAS y Arteta. El estudio reveló que tumor muestra una marcada heterogeneidad, algunas áreas de necrosis y una neovascularización central y periférica. Además, Celecoxib redujo significativamente la invasión tumoral en el hígado (p < 0,05). Otros órganos no sufrieron diferencias significativas cuando eran comparados con el grupo tratado. Los resultados son similares a descripciones parciales realizadas previamente y son comparables a otras líneas tumorales. Se cree que la vía de administración del fármaco es crítica para la interpretación de los resultados. Estos resultados son importantes para la discusión de otras investigaciones en donde Celecoxib es usado como un fármaco antiangiogénico y sirve como base para futuras investigaciones con esta línea tumoral.

In the study of cancer diverse cellular lines are in use, each with its own characteristics. One of these tumor lines is the TA3 tumor variant, multi resistant to drugs. Although diverse studies exist in reference to this tumor line, there are no detailed morphological descriptions of this one, nor those that observe the effect of Celecoxib, a COX-2 tissue inhibitor. We used 18 mice divided in 3 groups that received PBS inoculation; TA3 tumor cell inoculation; cell tumor inoculation + treatment with Celecoxib (1000ppm) respectively. The mice were sacrificed and histologically processed with H & E, PAS and Arteta stain. The study revealed that tumor showed a marked heterogeneity, some areas of necrosis and central and peripheral neovascularization. Furthermore, Celecoxib significantly reduced tumor invasion in the liver (p< 0.05). Other organs did not show significant differences when compared with the treated group. The results are similar to partial descriptions realized in the past and are comparable to other tumor lines. It is estimated that the route of medication administration is critical for result interpretation. These results are important in the discussion of other research where Celecoxib is used as an antiangiogenic drug and serves as base for future research within this tumor line.

Descripción histológica e histoquímica del hígado de cobayo (Cavia porcellus) / Histological and histochemical description of the liver of the guinea pig (Cavia porcellus)

Si bien se han realizado estudios en el hígado de variadas especies, hay pocas investigaciones en cobayo, un roedor de fácil manejo y usado como animal de experimentación. El objetivo de este estudio fue describir en el hígado de cobayo, algunos aspectos histológicos e histoquímicos, lo cual permitiría realizar estudios experimentales. Se utilizaron 7 cobayos (Cavia porcellus) machos, obtenidos del Bioterio de la Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Las muestras fueron fijadas en formalina tamponada y procesadas para su inclusión en paraplast. Se realizaron cortes seriados de 5 um, los que fueron teñidos para estudios histológico e histoquímico. El hígado presentó una arquitectura lobulillar con límites poco definidos y espacios porta constituidos por estructuras vasculares y canaliculares biliares. Los cordones parenquimatosos estaban constituidos por hepatocitos de aspecto cuboide a poligonal que se disponían en forma radial desde la vena centro lobulillar. En las células hepáticas se demostró la presencia de glucógeno, mucinas neutras y hemosiderina. El diámetro medio del hepatocito fue de 17,25 um y el del núcleo fue de 7,31 um. El hígado de cobayo presenta similitudes con otras especies; sin embargo, para determinar parámetros morfológicos, se deben considerar: la edad, las condiciones medioambientales, la alimentación, etc.

While studies have been conducted in the liver of different species, there is little research on the guinea pig, a rodent of easy handling and used as anexperimentationanimal. The aim was to describe in the guinea pig liver, some histological and histochemical aspects, which would allowexperimental studies to be carried out. We used seven male guinea pigs (Cavia porcellus) obtained from the Bioterium of the Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Samples were fixed in buffered formalin and processed for inclusion in paraplast. Serial thick of 5 um were stained for histological and histochemical studies. The liver presented a lobular architecture vague borders and portal tracts consisting of vascular structures and canalicular bile. Parenchymal cords were composed of hepatocytes with a cuboidal to polygonal appearence, and radially distributed from the central lobular vein. It showed the presence of glucogen liver cells, and hemosiderin neutral mucins. The average diameter of hepatocytes was 17.25 um and the nucleous was of 7.31 um. The guinea pig liver shows similarities with other species, however, to determine morphological parameters, age, environmental conditions of animals, feeding, etc. must be considered.

Estudio Estereológico del Hígado de Cobayo (Cavia porcellus) / Stereological Study of the Guinea-pig Liver (Cavia porcellus)

The liver is a widely researched organ for having an infinity of functions. On the other hand, Stereologyallows the access of quantitaive data of the study´s structure. Having access to this tpe of date of hepatocitos and sinusoids Under normal physiological conditions, it is necessary to determine how the number of these cells varies in pathological conditions. The principal objective of this investigation was to describe the morphology of the liver of cobayo, through Stereology, setting the bases for future morphofuncional investigations. Five adult males of the Cavia porcellus species were used, of which the liver was extracted and its volume determined, applying the Scherle method. Subsequently five pieces of aleatoria form were obtained which were set in an aqueous Bouin solution. Of these samples 3µm cuts were obtained, that were dyed with hematoxilina-eosina. For the stereological study the M42 system was used. The following were determined: the number densities, volume and surface and total number of hepatocitos and sinusoides. An index of lesser significance or equal to 0,05. The NV of hepatocitos was9.20 x 105 /mm³, V V de 70.04% and SV of 254.95 mm²/mm³. In the case of the sinusoides NV was 1.94 x 105 /mm³, V V of 24.86% and SV de 47.01 mm²/mm³. The total number of hepatocites was of 2.8 x 107 and sinusoides 0.61 x 107. While comparing the results obtained in Cavia porcellus and those obtained in other species, a quantitative variation in the hepatic morphology is observed. With these results it is possible to establish the bases for experimental research.

El hígado es un órgano ampliamente investigado por la infinidad de funciones que posee. Por otra parte, la Estereología permite obtener datos cuantitativos de la estructura en estudio. Tener acceso a este tipo de datos de los hepatocitos y sinusoides en condiciones fisiológicas normales, es necesario para determinar como varía el número de estas células en condiciones patológicas. El objetivo principal de esta investigación fue describir la morfología del hígado de cobayo a través de la Estereología, sentando las bases para futuras investigaciones morfofuncionales. Se utilizaron 5 machos adultos de la especie Cavia porcellus, a los cuales se les extrajo el hígado y se determinó su volumen aplicando el método de Scherle. Posteriormente, se obtuvieron 5 trozos de forma aleatoria, los que fueron fijados en solución de Bouin acuoso. De estas muestras se obtuvieron cortes de 3µm, que fueron teñidos con hematoxilina-eosina. Para el estudio estereológico, se usó el sistema M42. Fueron determinados: las densidades de número, volumen y superficie y número total de hepatocitos y sinusoides. Se consideró un índice de significancia menor o igual a 0,05. El NV de hepatocitos fue de 9,20 x 105 /mm³, V V de 70,04% y el SV de 254,95 mm²/mm³. En el caso de los sinusoides el NV fue de 1,94 x 105 /mm³, V V de 24,86% y el SV de 47,01 mm²/mm³. El número total de hepatocitos fue de 2,8 x 107 y sinusoides 0,61 x 107. Al comparar los resultados obtenidos en Cavia porcellus y los obtenidos en otras especies, se observa una variación cuantitativa en la morfología hepática. Con estos resultados es posible establecer bases para investigaciones experimentales.

Presencia de Receptores de Estrógenos y de Progesterona en el Endometrio de Ovejas Prepúberes: Estudio Inmunocitoquímico / Presence of Estrogen and Progesterone Receptors in Endometrium of Prepubertal Sheeps: Immunocitochemistry Study

Los receptores esteroidales endometriales tienen un papel esencial en la fisiología reproductiva, siendo ellos determinantes del estado morfuncional del tracto genital y especialmente del endometrio en el cual se implantará el embrión. Se estudió la presencia de receptores de estrógenos y progesterona en el endometrio de ovejas Rommey Marsh prepúberes (n= 3). Se obtuvieron muestrasde pared uterina para estudios histológico e inmunocitoquímico.El endometrio de la oveja prepúber muestra histológicamente carúnculas, áreas aglandulares de estroma denso rico en fibroblastos que se convertirán en puntos de inserción placentaria durante la gestación y áreas intercarunculares constituidas por endometrio glandular proliferativo de estroma compacto y vasos poco prominentes. La inmunocitoquímica reveló, para los receptores de estrógenos, inmumnoreactividad positiva moderada en el estroma endometrial ymuy aisladamente en el epitelio glandular,noencontrándose diferencias entre zona caruncular e intercaruncular. Losreceptores de progesteronapresentaron positividad estromal siendo algo más intensa en la zona intercaruncular. Concluimos que la oveja Rommey Marsh presentareceptores de estrógenos y progesterona fisiológicamente activos en su endometrio ya en etapa prepúber, o sea, antes de comenzar sus ciclos ováricos, los que podrían ser inducidos y regulados por hormonas exógenas, con el fin de aumentar la eficiencia y prevenir disfunciones reproductivas.

The endometrial esteroid receptors play an essential paper in the reproductive physiology being them decisive on the morophuncional state of the genital tract and especially of the endometrium in which the embryo will be implanted. We studied the presence of estrogens and progesterone receptors in the endometrium of Rommey Marsh prepubertal sheep (n=3) samples of uterine wall were obtained for histologycal and and Inmunocitochemestry study. The endometrium of the prepubertal sheep shows histologycaly caruncles, aglandulares areas of dense estroma rich in fibroblastos, that will become points of placental insertation during the gestation and intercarunculares areas constituted by endometrium glandular proliferative of compact estroma and not very prominent vessels. The Inmunocitochemestry revealed for the estrogens receptors inmumnoreactivity positive moderated in the estroma endometrial and very scattered in the glandular epithelium, not being differences between area caruncular and intercaruncular. The progesterone receptors presented positive inmunoreactivity estromal being more intense in the intercaruncular area We conclude that the sheep Rommey Marsh shows estrogens and progesterone receptors physiologically active in its endometrium already in prepubertal stage this is before beginning its ovarian cycles, those could be induced and regulated by exogenous hormones with the purpose of to increase the efficiency and to prevent reproductive disfunctiones.